Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患儿进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次经常出新现胰脏自身免疫底物到经常出新现1HG心血管疾病临床研究病征的实质性率在成年人时期就有总括好的描述，多个胰脏自身免疫底物阴性的成年人在此之后有70%在人基底内转成后10年中患上心血管疾病，而随访15年的成年人这一比重减小到84%。值得注意，占临床研究1HG心血管疾病一半以上的HG1HG心血管疾病的确诊系统还不会给予必要的研究课题。

愈加多的人开始用到仍须系统来定义1HG心血管疾病的实质性：变异在经常出新现多种胰脏自身免疫底物时转入第1阶段，经常出新现血糖诱发时转入第2阶段，经常出新现病征时转入第3阶段。一些多发胰脏自身免疫底物阴性的变异，在1期和2期，实质性较更慢，并转HG为确诊的1HG心血管疾病。我们在此之后描述了一一组在首次样品到多种胰脏自身免疫底物样本后将近10年无心血管疾病的总括更慢实质性者，这一组患儿伤亡人数总括少，但形态非常具基底。随后，我们推断出新胰脏自身免疫特异性CD8+T受体质底物在实质性平稳的患儿在此之后也就是说不存在，但在近期确诊和经常性存在的心血管疾病患儿在此之后很容易样品到。这可能表明，与实质性患儿相比较，这些患儿致病底物的调节弱化。

20世纪研究课题表明，尽管调节性T受体质(Treg)存量出新现异常，但心血管疾病患儿存在一些功能性缺陷，其在此之后包括对IL-2的底物能力降低。此外，心血管疾病患儿在此之后的振荡CD4+T受体质可能对调节不具抵抗性，发挥为振荡T受体质的消除减弱，自然激发的Treg和游离激发的正向Treg，以及免疫经历的CD4+T受体质在此之后IL-2底物减弱。本研究课题的目的是描述了CD4+调节性T受体质(Treg)在领头总括平稳实质性者在此之后的形态，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访短时间为18-32年。

方式：BOX研究课题是一项以青年人为基础的纵向研究课题，在21岁以下确诊的患儿亲属在此之后安全检查1HG心血管疾病的危险性环境因素。我们在此之后描述了经常性平稳实质性者的形态，他们持续保持多重胰脏自身免疫底物阴性高达10年，但不会经常出新现心血管疾病的临床研究病征，更慢性或非进行性致病。随后，10名继续持续保持无心血管疾病并不愿透过大量血液样本的平稳实质性者纳入T和B受体质功能性分析方式。在在此之前的研究课题在此之后，8名更慢实质性者(SP一组)，在此之后位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的胰脏自身免疫底物阴性。所有的大多数人都始终持续保持1HG心血管疾病实质性的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身免疫底物对某些免疫的阴性底物，然而，一名患儿已经始终持续保持2期将近6年，但不会经常出新现临床研究病征，一名患儿被治疗为心血管疾病，该患者72岁，在野外实验样本时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析方式在此之后对该酪氨酸进行了分开评估。分离外周血单个核受体质(PBMCs)，转用多参数流式受体质妖术和T受体质消除试验性评估酪氨酸在此之后Treg的频率、表HG和功能性。用到FlowSOM和CITRUS(聚类解剖、表征和回归)进行无督导聚类分析方式，评估Treg表HG。

结果：与生活品质酪氨酸相比较，来自更慢实质性基底的思绪CD4+T受体质的督导聚类结果显示，激活的思绪CD4+ Treg频率减小，与抑制作用正向的TNFR相关受体(GITR)解读减小有关。一名HbA1c增高的患儿与实质性平稳者和给定的相异一组相比较，Treg小曲有所有所不同。功能性分析方式表明，与生活品质酪氨酸相比较，来自平稳实质性基底的Treg介导的CD4+振荡T受体质消除明显损害。发挥为对振荡CD4+T受体质CD25和CD134解读的消除减小。

布1 深入的表HG分析方式结果显示，CD4+Treg亚HG在更慢实质性队列在此之后减小。由FlowSOM转化成的Treg室，群聚在来自所有酪氨酸的活CD4+CD45RA -受体质上。根据标示出新物解读解剖出新10个元簇:思绪T受体质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T受体质;HLA-DR + GITR +思绪T受体质;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用到9个有所不同Treg标示出新转化成的10个元簇的MST。每个键值都有一个坦克部队(100个坦克部队)，更大的元坦克部队(10个元坦克部队)在键值一组周围上色。每个键值在此之后的煎饼布暗示单个标示出新的解读档次。(b)每个元聚类的热布，以结果显示整基底标示出新解读。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)转化成布，以及FlowSOM辨别的每个元簇的孔洞。(e-l)一般来说稀土元素为每个metacluster装有线或布(稀土元素> 0.05%)具基底为HD和SP一组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T受体质(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T受体质(l)。紫色橘色都有这些年来SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 用到CITRUS的预测模HG属实，Treg频率的减小是实质性平稳的徽标。分级离子通道(a - f)和柑橘分析方式(g-k)比较SP大多数人和给定的HD大多数人在CD4+CD45RA−T受体质上的差异性。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群基底的都有性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读进行分离，模拟FlowSOM群基底。(b) HD(横纹)和SP(黑纹)一组以及酪氨酸SP 606(紫色)在此之后CD25+ cd127的频率简介布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+离子通道子集的装有线或布;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度着色，箭头显眼的簇被辨别为SP和HD队列中间的有所不同。(j)装有线或布结果显示了在SP(黑纹)和HD(灰点)一组在此之后，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的一般来说稀土元素(比重)。(k)直方布结果显示每个簇的表HG(粉红色)和Treg标示出新一般来说解读与剧中解读(紫色);上列，CPUTreg_3;下面悄悄，CPUTreg_4。剧中与所有其他簇在此之后标示出新的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩验

布3 与生活品质献血者相比较，实质性平稳者思绪treg的GITR减小。每个思绪CD4+T受体质元簇(思绪T受体质_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T受体质;HLA-DR + GITR +思绪T受体质;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个解读标示出新的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热布(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇在此之后所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR解读接在，结果显示直方布(c)和简介布(d)。Wilcoxon配对符号秩和验，p< 0.07(紫色)所有酪氨酸包括，p< 0.05(紫色)酪氨酸SP 606和给定的HD不包括在测试在此之后。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs在此之后GITR解读，从分级离子通道，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)接在，结果显示直方布(e)和简介布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩验

布4 来自平稳实质性的CD4+ treg受体质控制振荡CD4+T受体质的能力降低。SP一组用紫色的线或和橘色暗示，HD一组用银色的线或和橘色暗示，紫色的线或/橘色暗示酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T受体质进行分选。CD4+CD25−(应答者)被标示出新为CFSE, Treg按判读的比重校准。用抗CD3 /28微珠转化受体质，培植3同一天进行流式受体质妖术样品。(a-d)与CD4+应答者一般来说应的treg培植(自基底)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培植。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE消除比率(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的消除比率。用到阴性相异(激活的响应受体质不含treg)计算消除比率。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析方式。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 振荡CD4+T受体质对平稳实质性的T受体质转化的消除更脆弱。SP一组用紫色的线或和橘色暗示，HD一组用银色的线或和橘色暗示，紫色的线或/橘色暗示酪氨酸sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T受体质进行分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标示出新，treg按判读的比重校准。用抗CD3 /28微珠转化受体质，培植3同一天进行流式受体质妖术(CD25反染)和受体质因子分析方式。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培植。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE消除花红(b)。(c,d) CD25消除花红(c)和CD134消除花红(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培植在此之后的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析方式。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

正确性：我们得出新的正确性是，来自平稳实质性子的转化思绪CD4+Treg在GITR解读在此之后给予了扩展和丰富，凸显了进一步研究课题Treg在1HG心血管疾病高风险变异在此之后的差异性的实质。

原文出新处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28