Diabetologia：作用于但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到去甲免疫反应到用到1HG肝炎诊断腹泻的令人满意叛将在孩童以前就有不太好的刻画，多个去甲免疫反应乙型肝炎的孩童里面有70%在抗体变换后10月内患上肝炎，而随访15年的孩童这一%-增高到84%。比起之下，占诊断1HG肝炎一半以上的HG1HG肝炎的得病的系统还无法得到充分的研究成果。

越来越多的人开始应用于分期系统来表述1HG肝炎的令人满意：有机体在用到多种去甲免疫反应时转入第1下一阶段，用到血糖间歇性时转入第2下一阶段，用到腹泻时转入第3下一阶段。一些多发去甲免疫反应乙型肝炎的有机体，在1期和2期，令人满意较想像中快，并转型为得病的1HG肝炎。我们之前刻画了一小组在首次监测到多种去甲免疫反应取样后大概10年无肝炎的想像中想像中快令人满意者，这小组病变人数少，但完全相同之处相当确实。随后，我们断定去甲自身上皮细胞专一性CD8+T巨噬细胞自由基将在令人满意比较想像中快的病变里面基本不不存在，但在近期得病和长期不存在的肝炎病变里面很容易监测到。这意味著指出，与令人满意病变比起，这些病变免疫自由基将的通气增强。

早期研究成果指出，尽管通气性T巨噬细胞(Treg)总数情况下，但肝炎病变不存在一些机制缺点，其里面包括对IL-2的自由基将技能减低。此外，肝炎病变里面的震荡CD4+T巨噬细胞意味著对通气颇具抵抗性，乏善可陈为震荡T巨噬细胞的可抑制消退，自然诱发的Treg和体外诱发的抑制Treg，以及上皮细胞境遇的CD4+T巨噬细胞里面IL-2自由基将消退。本研究成果的目标是刻画了CD4+通气性T巨噬细胞(Treg)在一小群想像中比较想像中快令人满意者里面的完全相同之处，他们的总人数为43岁(31-72岁)，随访时长为18-32年。

方法：BOX研究成果是一项以老年人基础上的纵向研究成果，在21岁以下住院的病变亲族里面定期检查1HG肝炎的凶险因素。我们之前刻画了长期比较想像中快令人满意者的完全相同之处，他们保持多重去甲免疫反应乙型肝炎有约10年，但无法用到肝炎的诊断腹泻，想像中快性或非完成性免疫。随后，10名继续保持无肝炎并愿意提供大量血液循环取样的比较想像中快令人满意者确立T和B巨噬细胞机制归纳。在目前的研究成果里面，8名想像中快令人满意者(SP小组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁彼此间的去甲免疫反应乙型肝炎。所有的自发性都处于1HG肝炎令人满意的1期，尽管一些人随后失去了去甲免疫反应对某些上皮细胞的乙型肝炎自由基将，然而，一名病变从未处于2期大概6年，但无法用到诊断腹泻，一名病变被治疗为肝炎，该成年人72岁，在采集实验取样时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳里面对该ADP完成了单独审核。分开外周血单个核分裂巨噬细胞(PBMCs)，改用多常量流式巨噬细胞精和T巨噬细胞可抑制试验审核ADP里面Treg的频叛将、变异和机制。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、比如说和回归)完成无监督聚类归纳，审核Treg变异。

结果：与身心健康ADP比起，来自想像中快令人满意体的心灵CD4+T巨噬细胞的监督聚类结果显示，诱导的心灵CD4+ Treg频叛将增高，与糖皮质激素抑制的TNFR相关蛋白(GITR)隐含增高有关。一名HbA1c增高的病变与令人满意比较想像中快者和匹配的对照小组比起，Treg谱有所完全相同。机制归纳指出，与身心健康ADP比起，来自比较想像中快令人满意体的Treg介导的CD4+震荡T巨噬细胞可抑制引人注意毁损。乏善可陈为对震荡CD4+T巨噬细胞CD25和CD134隐含的可抑制增高。

布1 深入的变异归纳结果显示，CD4+Treg亚HG在想像中快令人满意队列里面增高。由FlowSOM作用于的Treg一楼，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标明物隐含鉴定出10个元簇:心灵T巨噬细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)应用于9个完全相同Treg标明作用于的10个元簇的MST。每个路由器都有一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在路由器小组周围上色。每个路由器里面的饼布坚称单个标明的隐含级别。(b)每个元聚类的热布，以结果显示整体标明隐含。(c, d)为HD小组(c)和SP小组(d)作用于布，以及FlowSOM定位的每个元簇的大块。(e-l)相对于稀土元素为每个metacluster木箱中央线布(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP小组:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T巨噬细胞(l)。黄色格孙子都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推大写秩检验。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 应用于CITRUS的预测模HG证实，Treg频叛将的增高是令人满意比较想像中快的标志。评定暂时性(a - f)和柑橘归纳(g-k)比较SP自发性和匹配的HD自发性在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)表型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l人群的权威性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3钼，然后通过HLA-DR和GITR隐含完成分开，模拟FlowSOM人群。(b) HD(网纹)和SP(蓝点)小组以及ADPSP 606(黄色)里面CD25+ cd127的频叛将汇总布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性孙子集的木箱中央线布;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑橘簇旋转由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含准确度着色，箭头突出的簇被定位为SP和HD队列彼此间的完全相同。(j)木箱中央线布结果显示了在SP(蓝点)和HD(灰点)小组里面，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对于稀土元素(%-)。(k)直方布结果显示每个簇的变异(白色)和Treg标明相对于隐含与历史背景隐含(金色);上列，闪存Treg_3;比如说一行，闪存Treg_4。历史背景与所有其他簇里面标明的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推大写秩检验

布3 与身心健康献血者比起，令人满意比较想像中快者心灵treg的GITR增高。每个心灵CD4+T巨噬细胞元簇(心灵T巨噬细胞_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +心灵T巨噬细胞;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)监测每个隐含标明的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的隐含热布(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(黄色)的FlowSOM GITR隐含串联，结果显示直方布(c)和汇总布(d)。Wilcoxon以此类推大写秩和检验，p< 0.07(黄色)所有ADP包括，p< 0.05(金色)ADPSP 606和匹配的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR隐含，从评定暂时性，从所有HD(灰色)、所有SP(金色)和SP 606(黄色)串联，结果显示直方布(e)和汇总布(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推大写秩检验

布4 来自比较想像中快令人满意的CD4+ treg巨噬细胞控制震荡CD4+T巨噬细胞的技能减低。SP小组用金色的中央线和格孙子坚称，HD小组用粉红色的中央线和格孙子坚称，黄色的中央线/格孙子坚称ADPsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞完成分选。CD4+CD25−(应将答者)被标明为CFSE, Treg按观察的%-反应物。用抗CD3 /28微珠诱导巨噬细胞，人才培养3当晚完成流式巨噬细胞精监测。(a-d)与CD4+应将答者相对于应将的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应将答者人才培养。(a,b,f) CFSE增生(a,e)和CFSE可抑制百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制百份。应用于乙型肝炎对照(诱导的响应将巨噬细胞不含treg)计算可抑制百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

布5 震荡CD4+T巨噬细胞对比较想像中快令人满意的T巨噬细胞诱导的可抑制更引人注目。SP小组用金色的中央线和格孙子坚称，HD小组用粉红色的中央线和格孙子坚称，黄色的中央线/格孙子坚称ADPsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞完成分选。CD4+CD25−(应将答者)被cfsel标明，treg按观察的%-反应物。用抗CD3 /28微珠诱导巨噬细胞，人才培养3当晚完成流式巨噬细胞精(CD25反染)和巨噬抑制归纳。HD Treg与HD、SP或sp606应将答者携手人才培养。(a,b) CFSE增生(a)和CFSE可抑制调升(b)。(c,d) CD25可抑制调升(c)和CD134可抑制调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养里面的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得出的论点是，来自比较想像中快令人满意孙子的诱导心灵CD4+Treg在GITR隐含里面得到了扩展和丰富，特别强调了再进一步研究成果Treg在1HG肝炎风险有机体里面的差异性的必要性。

书名出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28